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你知道DNA提取純化流程有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!

更新時間:2023-11-21點(diǎn)擊次數(shù):1469
  DNA提取純化流程
  你知道DNA提取純化流程有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!
  一、樣本采集與保存
  1.新鮮:新鮮樣本中受到內(nèi)源性核酸酶影響相對最小,得到DNA質(zhì)量相對更好。
  2.適量:投入過多樣本,后續(xù)樣本裂解不充分從而影響DNA提取情況,還會引入過多雜質(zhì)及內(nèi)源性核酸酶。
  3.不同類型的樣本在采集與保存時也會存在差異
  4.植物組織保存時間:對于含有多糖多酚等次生代謝產(chǎn)物的衰老葉片可在4℃黑暗環(huán)境下饑餓1-2天;進(jìn)行低溫或冷凍保存可以避免內(nèi)源性DNA酶對樣本中的DNA進(jìn)行一個降解。
  5.動物組織保存時間:-20℃短期保存(1-3個月),-70℃長期保存;福爾馬林固定時間8-24h內(nèi)為宜,樣本存放時間不宜超過1年;FFPE樣本保存溫度4℃,建議不超過3年。
  二、樣本處理方式
  1.動物組織:液氮研磨或勻漿。
  2.植物組織:液氮研磨(最推薦),研磨充分又保證樣本處于低溫條件下避免DNA降解。
  3.哺乳動物血液樣本:DNA存在于含有細(xì)胞核的白細(xì)胞中,而大量存在的紅細(xì)胞會引入更多雜質(zhì)和核酸酶,所以需要提前使用紅細(xì)胞裂解液對紅細(xì)胞進(jìn)行去除。
  4.細(xì)胞樣本:貼壁細(xì)胞胰酶消化處理再做收集,懸浮細(xì)胞只要離心棄上清。
  5.細(xì)菌樣本:溶菌酶破壁處理,如金黃色葡萄球菌加入一定量的溶菌酶在37℃條件下孵育30min就可完成破壁的處理。
  6.真菌樣本:酶解破壁或液氮凍融或超聲裂解法。
  7.FFPE樣本:脫蠟處理(二甲苯或礦物油類的物質(zhì)進(jìn)行脫蠟處理)。
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