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百奧益康腫瘤組織解離試劑盒:高效制備單細胞懸液的核心技術(shù)解析

更新時間:2025-03-04點擊次數(shù):1007

百奧益康腫瘤組織快速解離試劑盒作為腫瘤微環(huán)境研究的革命性工具,通過創(chuàng)新的溫和酶解腫瘤解離系統(tǒng),實現(xiàn)了病理組織到高活性單細胞懸液的高效轉(zhuǎn)化。該產(chǎn)品以du-te的酶學調(diào)控機制突破傳統(tǒng)消化方法的局限,為腫瘤異質(zhì)性研究、PDX模型構(gòu)建及免疫治療研發(fā)提供關(guān)鍵技術(shù)支撐。

一、技術(shù)原理與核心組分

本品采用三階酶控解離技術(shù),由膠原酶VI200U/mg)、中性蛋白酶(250BAEE單位)及熱滅活胎牛血清(FBS)組成定向酶解系統(tǒng):

·空間選擇性裂解:膠原酶VI靶向降解腫瘤間質(zhì)中的I/III型膠原纖維(占實體瘤ECM65%-80%

·膜結(jié)構(gòu)保護:含10mM鈣離子穩(wěn)定劑,維持整合素-ECM相互作用完整性

·RNA保護技術(shù):zhuan-li性RNase抑制劑使RIN值穩(wěn)定≥8.0

配套的機械解離模塊采用漸進式篩網(wǎng)系統(tǒng)(500μm→70μm梯度過濾),結(jié)合離心渦旋技術(shù),將細胞活性維持在93%以上(臺盼藍檢測)。

二、標準化操作流程優(yōu)勢

1. 預(yù)處理優(yōu)化4℃ PBS漂洗)

快速洗脫紅細胞(裂解緩沖液處理3min),去除90%以上血液成分,避免血紅蛋白對后續(xù)測序的干擾。

2. 時序控溫消化
      37℃震蕩消化20min(酶活性峰值時段),配套磁珠攪拌系統(tǒng)實現(xiàn)酶促反應(yīng)均質(zhì)化:

·qian-10min:膠原酶主導(dǎo)間質(zhì)解離

·10min:中性蛋白酶釋放上皮細胞團

3. 智能終止系統(tǒng)
  du-you的FBS終止液含α2-巨球蛋白(1mg/ml),可在30秒內(nèi)wan-quan滅活蛋白酶,mRNA完整度較傳統(tǒng)FBS終止法提升40%。

三、技術(shù)創(chuàng)新與性能驗證

  對比傳統(tǒng)機械研磨法,本試劑盒展現(xiàn)顯著優(yōu)勢:

指標

傳統(tǒng)方法

百奧益康試劑盒

細胞存活率

65-75%

92.3±1.8%

CD45+細胞捕獲率

≤60%

88.7%

單細胞得率/g組織

0.5-1×10^6

3.2×10^6

解離耗時

90-120min

35min

 通過ISO13485認證的原代腫瘤細胞高效分離試劑盒已成功應(yīng)用于乳腺癌(MCF-7)、肝癌(HepG2)等PDX模型構(gòu)建,單細胞轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)顯示細胞周期基因表達偏移值<0.15。

四、應(yīng)用場景拓展

1.單細胞多組學研究:兼容10x Genomics平臺,細胞捕獲率>80%

2.類器官培養(yǎng):干細胞標志物LGR5+細胞保留率提升至73%

3.CAR-T藥效評估:可獲得>95%活性的腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs

 實驗證明,使用本新鮮腫瘤組織快速消化試劑制備的細胞懸液,在流式檢測中CD326+上皮細胞純度達91.2%,較傳統(tǒng)方法提升2.3倍,滿足《Nature Protocols》對腫瘤微環(huán)境研究的技術(shù)規(guī)范。

該產(chǎn)品通過調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)活性,實現(xiàn)腫瘤細胞-基質(zhì)同步解離的技術(shù)突破,為精準醫(yī)學時代下的腫瘤研究建立了新的技術(shù)標準。憑借優(yōu)異的重復(fù)性(批間差異<5%)和標準化操作流程,現(xiàn)已成為國內(nèi)外腫瘤研究實驗室的試劑耗材之一。

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