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如何選擇熒光蛋白

更新時(shí)間:2024-08-22點(diǎn)擊次數(shù):1043
  如何選擇熒光蛋白
  熒光標(biāo)記在生物學(xué)的各個(gè)研究領(lǐng)域擁有廣泛的應(yīng)用,已成為探索體內(nèi)或細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的重要工具。通常存在兩種熒光標(biāo)記方式,一是利用細(xì)胞表達(dá)的熒光蛋白,另一是采用化學(xué)合成的熒光分子。下面讓我們一起來(lái)看看該如何選擇熒光蛋白吧!
  1.激發(fā)波長(zhǎng)/發(fā)射波長(zhǎng):每一種熒光蛋白都具備d特的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng),因此,所選熒光蛋白必須與實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的激發(fā)和檢測(cè)能力相匹配。
  2.寡聚反應(yīng):首代熒光蛋白易于形成寡聚體,當(dāng)其與目標(biāo)基因融合表達(dá)時(shí),可能會(huì)對(duì)目標(biāo)基因蛋白的生物學(xué)功能產(chǎn)生影響。因此,在融合表達(dá)時(shí),建議使用單體熒光蛋白,如mCherry或EGFP。
  3.氧氣:許多熒光蛋白的成熟過程需要氧氣參與,尤其是源自GFP的熒光蛋白,如EGFP、ECFP和EYFP。若這些熒光蛋白處于缺氧環(huán)境中,可能無(wú)法觀察到熒光信號(hào)。
  4.成熟時(shí)間:熒光蛋白的成熟時(shí)間指的是其正確折疊和發(fā)色團(tuán)形成所需的時(shí)間,此過程可能持續(xù)幾分鐘至數(shù)小時(shí)。因此,在選擇合適的熒光蛋白時(shí),考慮其成熟時(shí)間非常必要。
  5.溫度:溫度對(duì)熒光蛋白的成熟時(shí)間和熒光強(qiáng)度有影響。
  6.亮度:熒光蛋白的亮度由消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積計(jì)算得出。在許多情況下,與EGFP相比較熒光蛋白的亮度,發(fā)現(xiàn)某些熒光蛋白十分暗淡,因此,亮度也是需要考慮的因素之一。
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