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翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑之瞬時轉(zhuǎn)染步驟

更新時間:2024-08-22點擊次數(shù):1760

細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染是一種常用的實驗技術(shù),用于將外源DNARNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi),以研究基因表達(dá)、功能和調(diào)控機制。以下是細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染的一般步驟和注意事項。今天讓我們一起探討轉(zhuǎn)染效率低下的原因,以為提高轉(zhuǎn)染效率

一、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染步驟一

提前一天鋪板,并且確保細(xì)胞均勻分布,具體鋪板技巧,請翻看之前文章,細(xì)胞鋪板總是鋪不均勻?別急,方法來了!轉(zhuǎn)染前將細(xì)胞培養(yǎng)至70-80%的密度,以確保細(xì)胞處于活躍的生長狀態(tài)。

二、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染步驟二

轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒準(zhǔn)備:根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑的說明書準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒DNA。轉(zhuǎn)染試劑的用量通常根據(jù)細(xì)胞類型和轉(zhuǎn)染效率來確定,一般為2-10μL/孔(對于24孔板)。質(zhì)粒DNA的用量通常為0.1-1μg/孔(對于24孔板),具體用量需根據(jù)實驗?zāi)康暮娃D(zhuǎn)染效率進(jìn)行優(yōu)化。

三、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染步驟三

混合轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒:在無菌條件下,將轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒DNA混合在無血清培養(yǎng)基中,質(zhì)粒和轉(zhuǎn)染試劑混合后需用槍輕輕混勻,輕輕混合后孵育5-30分鐘,以形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物。

四、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染步驟四

轉(zhuǎn)染復(fù)合物添加到細(xì)胞:將轉(zhuǎn)染復(fù)合物添加到細(xì)胞培養(yǎng)孔中,輕輕搖動以確保均勻分布。

五、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染步驟五

孵育:將細(xì)胞培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱中,孵育一定時間(通常為24-48小時),以便DNA進(jìn)入細(xì)胞并表達(dá)。

六、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染步驟六

觀察和分析:根據(jù)實驗?zāi)康?,可以通過可熒光顯微鏡下通過熒光觀察轉(zhuǎn)染效率或提蛋白跑WB進(jìn)行驗證。

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七、翌圣生物PEI轉(zhuǎn)染試劑瞬時轉(zhuǎn)染部分產(chǎn)品列表

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

40816ES02

線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(速溶型)MW40000

100 mg


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