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流式細胞術(shù)的樣品制備方法

更新時間:2024-03-05點擊次數(shù):1132
  流式細胞術(shù)的測定對象是單細胞或單個微粒,在FCM技術(shù)中能夠制備出合格的單細胞懸液是非常重要的環(huán)節(jié),單細胞懸液來自于動植物的不同組織器官,也可來自于非生物樣品,F(xiàn)CM中大多數(shù)為生物樣品,生物樣品主要來源于培養(yǎng)細胞、血液、新鮮實體組織以及石蠟包埋組織等,不同的組織有不同的單細胞分散方法,因此建立切實可行的FCM單細胞懸液的具體制備方法,在流式細胞分析中至關(guān)重要。那么你知道流式細胞術(shù)的樣品制備方法都有什么嗎?讓我們一起來看看吧!
 
  、酶消化法
 
  酶的作用原理主要有三方面:一是破壞組織間的膠原纖維、彈性纖維等,二是水解組織細胞的緊密連接結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì),三是水解組織間的粘多糖物質(zhì)。酶消化法是實體組織分散為單細胞的主要方法之一。
 
  機械法
 
  機械法分散實體組織包括:用剪刀剪碎組織或用鋒利的解剖刀剁碎組織,用勻漿器勻漿,用細注射針頭反復(fù)抽吸細胞等,最后用300目尼龍網(wǎng)過濾細胞得到單細胞懸液。
 
  、化學(xué)處理法
 
  化學(xué)處理法的主要原理是:將組織細胞間起粘連作用的鈣、鎂離子置換出來,從而使細胞分散下來。
 
  四、注意事項:
 
  1. 需要注意的是酶學(xué)方法的使用條件和影響因素(如酶濃度、酶效價、作用時間、pH值)等,例如胃蛋白酶在堿性環(huán)境下失去活性、胰酶在中性溶液中活性欠佳。
 
  2. 采用網(wǎng)搓法同樣也可獲得大量細胞,但機械法容易造成細胞碎片和細胞團快,因此常與其他方法配合使用。
 
  3. 新鮮組織標(biāo)本應(yīng)及時處理保存,避免細胞自溶導(dǎo)致DNA降解。
 
  4. 根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇最佳固定方式;如采用酶學(xué)法需注意酶的溶劑、消化時間、pH值、濃度等,同時根據(jù)組織成分合理選用酶類,例如含大量結(jié)締組織腫瘤,如食管癌、乳腺癌、皮膚癌等應(yīng)選擇膠原酶。
 
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