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EZBioscience彩色染料法qPCR試劑盒(預(yù)混 ROX2型)(A0012-R2)產(chǎn)品介紹

更新時(shí)間:2024-03-01點(diǎn)擊次數(shù):1170

EZBioscience® 2× Color SYBR Green qPCR 預(yù)混液 (ROX2 plus) 使用經(jīng)過(guò)特殊修飾的 Taq DNA 聚合酶,該聚合酶受熱啟動(dòng)保護(hù)活化技術(shù)和優(yōu)化的qPCR緩沖液系統(tǒng),以進(jìn)行基于SYBR Green I的實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)。該混合物補(bǔ)充了惰性紅色染料。以及 EZBioscience® 彩色逆轉(zhuǎn)錄試劑盒含有惰性藍(lán)色染料,以避免移液錯(cuò)誤。在qPCR反應(yīng)中將cDNA和其他組分混合在一起,使溶液變成紫色。這在移液時(shí)提供了視覺(jué)幫助,并降低了反應(yīng)設(shè)置過(guò)程中移液錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn),尤其是在使用白色反應(yīng)容器時(shí)。染料不影響qPCR反應(yīng)的特異性或靈敏度。該混合物以 2× 的反應(yīng)濃度制備,可直接用于高模板和低模板 qPCR,具有高靈敏度、特異性和可靠性。

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法:

1. 陰性對(duì)照組可觀察到明顯擴(kuò)增

原因:使用的試劑或水被污染、引物二聚體的外觀

解決方法:更換新試劑或水并重試。反應(yīng)應(yīng)在超凈臺(tái)架上進(jìn)行,以盡量減少空氣污染、在35個(gè)周期后,陰性E對(duì)照組出現(xiàn)擴(kuò)增是正常的可以結(jié)合熔融曲線(xiàn)進(jìn)行分析

2. ct值出現(xiàn)太晚(大)

原因:放大效率低、模板的濃度太低、模板退化、擴(kuò)增子太長(zhǎng)、反應(yīng)中存在PCR抑制劑

解決方法:優(yōu)化反應(yīng),嘗試三步程序或重新設(shè)計(jì)引物、增加模板量,同時(shí)避免破壞擴(kuò)增效果、準(zhǔn)備新的模板,然后重試、擴(kuò)增子的長(zhǎng)度建議在100bp~200 bp之間、添加模板時(shí)通常會(huì)引入抑制劑,增加稀釋倍數(shù)或準(zhǔn)備新模板并重試。

3. 擴(kuò)增曲線(xiàn)形狀異常

原因:擴(kuò)增曲線(xiàn)粗略、曲線(xiàn)斷裂、曲線(xiàn)突然下降

解決方法:信號(hào)弱而引起的系統(tǒng)整流,升高模板濃度并重復(fù)反應(yīng)、模板的濃度太高,基線(xiàn)的結(jié)束值大于Ct值,減少基線(xiàn)的末端(Ct值-4),并重新分析數(shù)據(jù)、反應(yīng)管中存在氣泡,當(dāng)溫度升高時(shí),氣泡破裂,從而儀器檢測(cè)到熒光值的突然降低,快速旋轉(zhuǎn),仔細(xì)檢查反應(yīng)前是否有氣泡。

產(chǎn)品選購(gòu):

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

A0012-R2

彩色染料法qPCR試盒(預(yù)混 ROX2)

5ml

 


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