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細胞傳代培養(yǎng)的常見問題

更新時間:2024-02-24點擊次數(shù):809
  細胞培養(yǎng)幾乎是所有細胞生物學實驗的基礎。其中,細胞傳代是將部分細胞分離出來,重新接種到新的培養(yǎng)皿中,使細胞重新獲得足夠的營養(yǎng)條件和生長空間的過程。那么你知道細胞傳代培養(yǎng)的常見問題有哪些嗎?讓我們一起來看看吧!
  1、細胞何時進行傳代
  通常當細胞生長至w全匯合進行傳代,避免細胞生長過密,對于特殊情況,比如有接觸抑制的細胞,一般在密度70-80%就進行傳代,避免引起細胞分化。
  2、貼壁細胞胰酶消化如何控制時間
  貼壁細胞培養(yǎng)一個關鍵步驟胰酶消化,消化過度會導致細胞碎片增多,細胞成片脫落,嚴重影響細胞活性,并有部分細胞漂浮,隨棄去的胰酶流失,消化不足則細胞難于從瓶壁上吹下,反復吹打造成細胞損傷,活性下降。
  一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)細胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的細胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要對于新購買的細胞,可以先用低濃度的胰酶去摸索一下消化時間,可每隔1分鐘鏡下觀察細胞是否變圓,記錄最佳消化時間,下一次操作參考之前的記錄來控制時間即可。
  3、如何看活細胞
  可通過顯微鏡觀察:活細胞中間透亮,飽滿,有光澤,死細胞較暗?;蛲ㄟ^臺盼藍染色來計算細胞活力,活細胞排斥臺盼蘭,因而染成藍色的細胞是死細胞。有細胞計數(shù)儀的,可直接用計數(shù)儀計數(shù)。
  4、細胞傳幾代開始死亡或細胞存活率不佳,增值變慢
  可能是培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳;或者消化過度,對細胞有嚴重影響;或者是傳代比例不合適;細胞存在污染等。
  更多有關細胞傳代培養(yǎng)的常見問題,請聯(lián)系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司。
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