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細(xì)胞實驗的常見問題有哪些?如何解決呢?

更新時間:2023-09-08點擊次數(shù):1437

細(xì)胞培養(yǎng)做為生物學(xué)研究最基礎(chǔ)的技術(shù)之一,可以說是滲透科研界的方方面面。那么細(xì)胞實驗中的常見問題有哪些?應(yīng)該如何解決呢?讓我們一起來看看吧!

一、如何選用細(xì)胞系培養(yǎng)基?

優(yōu)先根據(jù)細(xì)胞來源公司提供的培養(yǎng)條件,。一般建議不要隨意更換培養(yǎng)基種類。細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用與原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基,可能造成細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化或無法存活,以及細(xì)胞的表型功能丟失。

二、細(xì)胞發(fā)生微生物污染時,應(yīng)如何處理?

直接丟棄或更換,將未受污染的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至其它培養(yǎng)箱,并用消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺以及二氧化碳培養(yǎng)箱。如發(fā)生真菌霉菌污染,需用紫外燈照射整個細(xì)胞間,從而消除可能產(chǎn)生的孢子。同時排除使用試劑的污染,包括培養(yǎng)基和血清,可以空培試驗。

三、為何培養(yǎng)基用一段時間后,顏色偏紫?

培養(yǎng)基隨著多次開蓋會使培養(yǎng)液 CO2 逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性從而變紫,尤其是剩余的培養(yǎng)基越少越容易變紫??蓪⑴囵B(yǎng)瓶瓶蓋旋松放入二氧化碳培養(yǎng)箱校正溶液 PH 值,過一段時間就會變回正常。變紫的培養(yǎng)基是可以繼續(xù)使用的,培養(yǎng)細(xì)胞時在培養(yǎng)箱會自動恢復(fù)顏色。

四、細(xì)胞培養(yǎng)液變黃變渾,如何處理?

細(xì)胞培養(yǎng)液變黃多半是細(xì)胞密度過大,細(xì)胞增殖速度過快,產(chǎn)生大量酸性代謝廢物,導(dǎo)致細(xì)胞營養(yǎng)不足。而培養(yǎng)液變渾多半是發(fā)生了細(xì)菌污染。出現(xiàn)這種情況應(yīng)立即進(jìn)行消化傳代處理。

五、血清中出現(xiàn)的沉淀是什么,有影響嗎?

① 纖維蛋白,是經(jīng)常出現(xiàn)的較大沉淀物,可達(dá)到 1~2 mm,用肉眼可觀察到;

② 膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì),是血清出現(xiàn)沉淀物的常見原因;

③ 磷酸鈣,也是一種常見沉淀物,通常會使血清出現(xiàn)渾濁,并且在 37 ℃ 培養(yǎng)時會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點,這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動,因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。

這些沉淀對細(xì)胞的生長是沒有影響的,如想去除沉淀,盡量采用離心方法,不建議使用過濾方法,因為會堵塞濾膜而且會造成污染的風(fēng)險。

六、細(xì)胞支原體污染如何處理?

支原體污染是比較難去除的,特別容易復(fù)發(fā),一般建議直接更換新的細(xì)胞,如特別精貴或重要的細(xì)胞可嘗試使用四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(泰樂霉素)、喹諾酮類抗生素。

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