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pei轉(zhuǎn)染試劑如何配置

更新時間:2023-04-23點擊次數(shù):2477
 
  pei轉(zhuǎn)染試劑廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞系包括293、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 Hela 細(xì)胞等。pei轉(zhuǎn)染試劑如何配置呢?
  一、pei轉(zhuǎn)染試劑配置前準(zhǔn)備:
  (1)通過胰酶消化收集細(xì)胞,用適當(dāng)?shù)耐阸培養(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。
  (2)根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完q后即可開始轉(zhuǎn)染。
  (3)轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。
  二、配置PEI-DNA混合物
  以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準(zhǔn)備兩支1.5mL離心管,一管將質(zhì)粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后于室溫靜置20-30min。
  三、pei轉(zhuǎn)染試劑配置后細(xì)胞孵育
  將420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。
  注:每次用100μM的核酸PEI轉(zhuǎn)染試劑儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。
  四、pei轉(zhuǎn)染試劑配置后細(xì)胞培養(yǎng)
  培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測到報告基因的表達(dá)。
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