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更新時(shí)間:2022-10-11點(diǎn)擊次數(shù):1998

  美國(guó)cellscript試劑盒包括用于體外轉(zhuǎn)錄的試劑盒以及使用帽類似物或加帽酶的5' RNA加帽的試劑盒。

l mRNA為什么要加帽:

1、防止5'末端被降解。

2、在細(xì)胞中,幫助成熟mRNA穿過核膜,進(jìn)入胞質(zhì)。

3、增強(qiáng)翻譯。

4、幫助后續(xù)可變剪接的過程。

l 加帽類型:

1、Cap 0m7G5ppp5Np:僅所加的鳥嘌呤核苷酸被甲基化,存在于單細(xì)胞。

2、Cap I型m7G5ppp5NmpNp:轉(zhuǎn)錄本第一個(gè)核苷酸的2'-O位也被甲基化,普遍存在于所有細(xì)胞。

3、Cap IIm7G5ppp5NmpNmpNp:轉(zhuǎn)錄本第一和第二位的2'-O位都甲基化,存在于10%-15%細(xì)胞中。

l 體外加帽的必要條件:

1、在基因組全長(zhǎng)克隆時(shí),必須在正向引物5'末端添加T7強(qiáng)啟動(dòng)子序列。

2、T7啟動(dòng)子作為體外轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子。

3、在正向引物5'末端加一個(gè)“蓋帽G",有利于提高體外轉(zhuǎn)錄得到的RNA分子的侵染活性。

美國(guó)cellscript試劑盒有:

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

簡(jiǎn)介

T7 mScript™ Standard mRNA Production System

C-MSC11610

10次

用于體外mRNA的轉(zhuǎn)錄過程, 將高產(chǎn)量轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)錄后加帽和加尾的優(yōu)點(diǎn)集于一身。

C-MSC100625

25次

T7-FlashScribe™ Transcription Kit

C-ASF3507

50次

用于使用T7 RNA聚合酶和經(jīng)典(GAUC) NTP生產(chǎn)體外轉(zhuǎn)錄的RNA。

T7-Scribe™ Standard RNA IVT Kit

C-AS3107

50次

SP6-Scribe™ Standard RNA IVT Kit

C-AS3106

50次

用于使用 SP6 RNA 聚合酶和經(jīng)典 (GAUC) NTP 生產(chǎn)體外轉(zhuǎn)錄的 RNA。

ScriptCap™ m7G Capping System

C-SCCE0625

25次

用于使用 ScriptCap Capping Enzyme、GTP SAM對(duì)體外轉(zhuǎn)錄的RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后加帽??蛇M(jìn)行cap0cap1加帽。

ScriptCap™ 2'-O-Methyltransferase Kit

C-SCMT0625

25次

用于將含有Cap 0帽的RNA轉(zhuǎn)化為

含有Cap I帽的 RNA。

ScriptCap™ Cap 1 Capping System

C-SCCS1710

10次

用于使用ScriptCap 加帽酶、ScriptCap 2'-O-甲基轉(zhuǎn)移酶、GTPSAM對(duì)體外轉(zhuǎn)錄的RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后加帽。Cap 0Cap I可分別加帽。

l 美國(guó)cellscript試劑盒(C-SCCS1710)原理:

ScriptCap™ Cap 1 Capping System可提供ScriptCap Capping Enzyme和ScriptCap 2'-O-Methyltransferase兩種酶進(jìn)行蓋帽過程。其中,ScriptCap Capping Enzyme可在體外通過三種酶促反應(yīng)催化一個(gè)cap nucleotide(帽核苷酸)連接到具有5'-三磷酸基團(tuán)的初始RNA的5'末端 ,從而形成Cap 0,其表現(xiàn)形式是:m7G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3') 。(m7G代表N7-甲基鳥苷帽核苷,ppp三磷酸鏈接帽苷碳端和RNA氮端,N1(pN)x-OH(3') 代表初始轉(zhuǎn)錄后RNA)。

ScriptCap 2'-O-Methyltransferase可介導(dǎo)Cap 0到Cap I的蓋帽過程,其可從供體SAM(S-腺苷甲硫氨酸)中轉(zhuǎn)移一個(gè)甲基到Cap 0的2'位置,從而形成Cap I。

l 美國(guó)cellscript試劑盒(C-SCCS1710)特點(diǎn):

1. ScriptCap™ Cap 1 Capping System提供ScriptCap Capping Enzyme和ScriptCap 2'-O-Methyltransferase(2'氧甲基轉(zhuǎn)移酶),可在RNA的5'末端產(chǎn)生Cap 0或Cap I帽結(jié)構(gòu),也可單獨(dú)獲得Cap 0或Cap I。

2. 反應(yīng)后的Cap RNA可直接進(jìn)行Poly(A)聚合反應(yīng),無需再次進(jìn)行處理,可方便進(jìn)行后續(xù)的翻譯過程。

3. ScriptCap Cap I Capping System改進(jìn)了共轉(zhuǎn)錄加帽方法,使其加帽效率可以接近100%,所有加帽RNA均能夠大量且正確產(chǎn)生,最終可以以合理的成本獲得大量且正確的加帽RNA 。

l 美國(guó)cellscript試劑盒(C-SCCS1710)應(yīng)用:

      該產(chǎn)品多用于用于動(dòng)物體外RNA轉(zhuǎn)錄合成過程,以進(jìn)行5'末端的Cap 0Cap 1結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生,提高體外RNA的穩(wěn)定性和翻譯效率。



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